Monoclonal antibodies to molluskan hemocyanin from Concholepas concholepas demonstrate common and specific epitopes among subunits.
Concholepas concholepas
Becker, M. I., De Ioannes, A. E, De Ioannes, P, Faunes, F, Moltedo, B, Oliva, H
https://www.liebertpub.com/doi/abs/10.1089/153685902761022715
Estudiamos la reactividad de anticuerpos monoclonales (MAbs) de ratón contra la hemocianina del gasterópodo marino chileno Concholepas concholepas (CCH). Esta proteína se ha utilizado con éxito como vehículo para producir anticuerpos contra haptenos y péptidos. Todos los MAbs (13) que pertenecen a la subclase IgG exhiben constantes de disociación (Kd) de 1 × 10-7 M a 1 × 10-9 M. Los MAbs se caracterizaron mediante ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) utilizando CCH tratado con diferentes procedimientos, que incluyen disociación en subunidades CCH-A y CCH-B, transferencia Western, digestión enzimática, desglicosilación química y desnaturalización térmica. Los MAb se clasificaron en tres categorías, según la especificidad de subunidad mediante ELISA. La distribución de epítopos muestra que las subunidades de CCH muestran epítopos comunes (grupo I, 5 MAbs, 1H5, 2A8, 3A5, 3B3 y 3E3), así como epítopos específicos para las subunidades de CCH-A (grupo II, 3 MAbs, 1B8, 4D8, y 8E5) y para las subunidades CCH-B (grupo III, 5 MAb, 1A4, 1E4, 2H10, 3B7 y 7B4). Los resultados se pueden resumir de la siguiente manera: (1) seis anticuerpos reaccionan con CCH desnaturalizado térmicamente, lo que sugiere que reconocen epítopos lineales, mientras que siete reconocen epítopos conformacionales; (2) la oxidación de restos de carbohidratos no afecta la unión de los MAb; (3) la digestión enzimática de CCH disminuye la reactividad de todos los anticuerpos independientemente de la proteasa utilizada (elastasa o tripsina); (4) reuniendo los datos anteriores, además del análisis de complementariedad epitópica, identificamos 12 epítopos diferentes en la molécula CCH reconocida por estos MAb. Los MAbs anti-CCH presentados aquí pueden ser herramientas útiles para comprender la organización de las subunidades del CCH y su estructura compleja, lo que puede explicar sus propiedades inmunogénicas e inmunoestimulantes en mamíferos.
We studied the reactivity of mouse monoclonal antibodies (MAbs) against the hemocyanin from the Chilean marine gastropod Concholepas concholepas (CCH). This protein has been successfully used as a carrier to produce antibodies to haptens and peptides. All MAbs (13) belonging to IgG subclass exhibit dissociation constants (Kd) from 1 × 10-7 M to 1 × 10-9 M. MAbs were characterized by enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) using CCH treated with different procedures, including dissociation into CCH-A and CCH-B subunits, Western blot, enzymatic digestion, chemical deglycosylation, and thermal denaturation. MAbs were classified into three categories, according to subunit specificity by ELISA. The epitope distribution shows that CCH subunits display common epitopes (group I, 5 MAbs, 1H5, 2A8, 3A5, 3B3, and 3E3), as well as specific epitopes for CCH-A subunits (group II, 3 MAbs, 1B8, 4D8, and 8E5) and for CCH-B subunits (group III, 5 MAbs, 1A4, 1E4, 2H10, 3B7, and 7B4). The results can be summarized as follows: (1) six antibodies react with thermal denatured CCH, suggesting that they recognize linear epitopes, whereas seven recognize conformational epitopes; (2) oxidation of carbohydrate moieties does not affect the binding of the MAbs; (3) enzymatic digestion of CCH decreases the reactivity of all antibodies irrespective of the protease used (elastase or trypsin); (4) bringing together the above data, in addition to epitopic complementarity analysis, we identified 12 different epitopes on the CCH molecule recognized by these MAbs. The anti-CCH MAbs presented here can be useful tools to understand the subunit organization of the CCH and its complex structure, which can explain its immunogenic and immunostimulating properties in mammals.
