Concholepas concholepas Ferritin H-like subunit (CcFer): Molecular characterization and single nucleotide polymorphism associated to innate immune response.
Concholepas concholepas
Chávez-Mardones, J, Gallardo-Escárate, C., Maldonado-Aguayo, W, Núñez-Acuña, G, Valenzuela-Muñoz, V
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La ferritina ha sido identificada como la principal proteína del almacenamiento y desintoxicación del hierro, desempeñando un papel fundamental en la homeostasis celular en los organismos vivos. Sin embargo, estudios recientes en invertebrados marinos han sugerido su asociación con el sistema inmunológico innato. En el presente estudio, se identificó una subunidad de ferritina del gasterópodo Concholepas concholepas (CcFer), que se caracterizó completamente mediante la técnica de amplificación rápida de los extremos del ADNc. Simultáneamente se realizó una prueba de provocación para evaluar la respuesta inmune contra Vibrio anguillarum. La longitud total del ADNc Ccfer era de 1030 pb y contenía 513 pb de marco de lectura abierto que codifica un péptido de 170 aminoácidos, que era similar a la subunidad H de ferritina descrita en los vertebrados. Las regiones no traducidas (UTR) se identificaron con una 50 UTR de 244 pb que contiene un elemento sensible al hierro (IRE) y una 30 UTR de 273 pb. La masa molecular prevista del aminoácido deducido de CcFer fue de 19,66 kDa y el punto isoeléctrico de 4,92. El análisis de transcripción genética reveló que CcFer aumenta contra infecciones por V. anguillarum, mostrando una expresión máxima a las 6 h después de la infección. Además, se detectó un polimorfismo de un solo nucleótido en la secuencia 64 de 50 UTR (SNP-64). El análisis cuantitativo en tiempo real mostró que el alelo mutante homocigoto (TT) se asoció significativamente con niveles de expresión más altos del grupo desafiado en comparación con las variantes salvaje (CC) y heterocigota (CT). Nuestros hallazgos sugieren que CcFer está asociado a la respuesta inmune innata en C. concholepas y que la presencia de SNP puede implicar una expresión transcripcional diferencial de CcFer.
Ferritin has been identified as the principal protein of iron storage and iron detoxification, playing a pivotal role for the cellular homeostasis in living organisms. However, recent studies in marine invertebrates have suggested its association with innate immune system. In the present study, one Ferritin subunit was identified from the gastropod Concholepas concholepas (CcFer), which was fully characterized by Rapid Amplification of cDNA Ends technique. Simultaneously, a challenge test was performed to evaluate the immune response against Vibrio anguillarum. The full length of cDNA Ccfer was 1030 bp, containing 513 bp of open reading frame that encodes to 170 amino acid peptide, which was similar to the Ferritin H subunit described in vertebrates. Untranslated Regions (UTRs) were identified with a 50 UTR of 244 bp that contains iron responsive element (IRE), and a 30 UTR of 273 bp. The predicted molecular mass of deduced amino acid of CcFer was 19.66 kDa and isoelectric point of 4.92. Gene transcription analysis revealed that CcFer increases against infections with V. anguillarum, showing a peak expression at 6 h post-infection. Moreover, a single nucleotide polymorphism was detected at 64 downstream 50 UTR sequence (SNP-64). Quantitative real time analysis showed that homozygous mutant allele (TT) was significantly associated with higher expression levels of the challenged group compared to wild (CC) and heterozygous (CT) variants. Our findings suggest that CcFer is associated to innate immune response in C. concholepas and that the presence of SNPs may involve differential transcriptional expression of CcFer.
